SDS-PAGE蛋白电泳套装
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名称 |
规格 |
保存条件 |
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5×蛋白上样缓冲液（含DTT） |
1ml |
-20度 |
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Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液 |
一包（10L） |
RT |
|
30%丙烯酰胺(29:1) |
100mlX2 |
2-8度 |
|
1.5mol/LTris(pH8.8) |
100mlX2 |
RT |
|
1.0mol/LTris(pH6.8) |
60ml |
RT |
|
过硫酸铵干粉 |
2g |
RT |
|
10%SDS |
10ml |
RT |
|
TEMED |
1.5ml |
RT |
|
说明书 |
一份 |
一份 |
产品简介
本公司提供的蛋白电泳套装包含凝胶制备，蛋白上样缓冲液及蛋白电泳上样缓冲液。
本公司生产的SDS-PAGE蛋白电泳套装是按照经典方法配制而成。本套装根据电泳体系的大小，可进行约50次左右。
使用说明：
一，前期工作：蛋白提取及定量。
二，蛋白上样液的制备：蛋白上样缓冲液解冻，轻轻混匀，按4体积蛋白样品加入一体积的5×蛋白上样缓冲液，混匀，沸水中水浴5分钟。
三，电泳液的配制：将一包电泳液干粉全部倒入1L－2L的烧柄中，加一定量的水溶解成2L配成5×Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液，用前再稀释5倍或者先配成1L成为10×Tris-甘氨酸蛋白电泳缓冲液，用前再稀释10倍。
四，取10-15支1.5ml离心管，将过硫酸铵干粉分装成100mg/支，标记好备用。
五，凝胶制备：
1， 取一支称好的100mg过硫酸铵干粉，加入1ml蒸馏水，混匀，此配好的10%过硫酸铵溶液2－8度可保存一周，一周后请用新的。洗干净电泳玻璃板，夹好。
2， 根据目标蛋白分子量大小，选取凝胶浓度，按下表配制。先配分离胶，再配浓缩胶。
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分离胶15% |
分离胶12% |
分离胶10% |
分离胶8% |
浓缩胶（5%） |
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总体积 |
10ml |
10ml |
10ml |
10ml |
5ml |
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30%丙烯酰胺(29:1) |
5ml |
4ml |
3.3ml |
2.7ml |
0.83ml |
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1M Tris-HCL (PH6.8) |
0 |
0 |
0 |
0 |
0.625ml |
|
1.5M Tris-HCL(PH8.8) |
2.5ml |
2.5ml |
2.5ml |
2.5ml |
0 |
|
10%SDS |
100ul |
100ul |
100ul |
100ul |
50ul |
|
ddH2O |
2.3ml |
3.3ml |
4.0ml |
4.6ml |
3.42ml |
|
10%过硫酸铵 |
100ul |
100ul |
100ul |
100ul |
75ul |
|
TEMED |
10ul |
10ul |
10ul |
10ul |
7.5ul |
注意：
1，TEMED和10%过硫酸铵最后加，在加入前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸铵在4℃有效期为一周，TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放37℃温箱凝固。灌完分离胶后，轻轻的加1ml ddH2O封上层，胶凝固后可见到分界线。灌浓缩胶前，先倾去水层，再用吸纸吸干。浓缩胶灌好后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后，放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，可防加样孔变形。
2，配制量可按上表等比加减。如果所用胶浓度与上面不同，可自行调整，主要是调整30%丙烯酰胺的量（需要浓度×总体积/30%），最后用水补足总体积。
六，上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等溴酚兰电泳到合适的位置，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
附：SDS-PAGE分离胶的浓度与最佳分离范围
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SDS-PAGE分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
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6%胶 |
57-212kD |
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8%胶 |
36-94kD |
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10%胶 |
20-80kD |
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12%胶 |
12-60kD |
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15%胶 |
10-43kD |
配制6%的PAGE分离胶
|
成分 |
所需各成分的体积(毫升) |
|
凝胶体积 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
|
蒸馏水 |
2.6 |
5.3 |
7.9 |
10.6 |
13.2 |
15.9 |
|
30%丙烯酰胺混合液 |
1.0 |
2.0 |
3.0 |
4.0 |
5 |
6.0 |
|
1.5mol/L Tris(pH8.8) |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
TEMED |
0.004 |
0.008 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
0.024 |
配制8%的PAGE分离胶
|
成分 |
所需各成分的体积(毫升) |
|
凝胶体积 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
|
蒸馏水 |
2.3 |
4.6 |
6.9 |
9.3 |
11.5 |
13.9 |
|
30%丙烯酰胺混合液 |
1.3 |
2.7 |
4.0 |
5.3 |
6.7 |
8.0 |
|
1.5mol/L Tris(pH8.8) |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
TEMED |
0.003 |
0.006 |
0.009 |
0.012 |
0.015 |
0.018 |
配制10%的PAGE分离胶
|
成分 |
所需各成分的体积(毫升) |
|
凝胶体积 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
|
蒸馏水 |
1.9 |
4.0 |
5.9 |
7.9 |
9.9 |
11.9 |
|
30%丙烯酰胺混合液 |
1.7 |
3.3 |
5.0 |
6.7 |
8.3 |
10.0 |
|
1.5mol/L Tris(pH8.8) |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
0.012 |
配制12%的PAGE分离胶
|
成分 |
所需各成分的体积(毫升) |
|
凝胶体积 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
|
蒸馏水 |
1.6 |
3.3 |
4.9 |
6.6 |
8.2 |
9.9 |
|
30%丙烯酰胺混合液 |
2.0 |
4.0 |
6.0 |
8.0 |
10.0 |
12.0 |
|
1.5mol/L Tris(pH8.8) |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.015 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.015 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
0.012 |
配制15%的PAGE分离胶
|
成分 |
所需各成分的体积(毫升) |
|
凝胶体积 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
|
蒸馏水 |
1.1 |
2.3 |
3.4 |
4.6 |
5.7 |
6.9 |
|
30%丙烯酰胺混合液 |
2.5 |
5.0 |
7.5 |
10.0 |
12.5 |
15.0 |
|
1.5mol/L Tris(pH8.8) |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
|
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.001 |
0.012 |
3. 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称上层胶、积层胶或堆积胶)
配制不同体积的浓缩胶
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成分 |
所需各成分的体积(毫升) |
|
凝胶体积 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
8 |
|
蒸馏水 |
1.4 |
2.1 |
2.7 |
3.4 |
4.1 |
5.5 |
|
30%丙烯酰胺混合液 |
0.33 |
0.5 |
0.67 |
0.83 |
1.0 |
1.3 |
|
1.0mol/L Tris(pH6.8) |
0.25 |
0.38 |
0.5 |
0.63 |
0.75 |
1.0 |
|
10%SDS |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.05 |
0.06 |
0.08 |
|
10%过硫酸铵 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.05 |
0.06 |
0.08 |
|
TEMED |
0.002 |
0.003 |
0.004 |
0.005 |
0.006 |
0.008 |
|
