细菌基因组DNA提取试剂盒
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试剂盒组成 |
50T |
200T |
保存温度 |
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RNaseA（10mg/ml） |
500ul |
2ml |
-20℃ |
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蛋白酶K（10mg/ml） |
500ul |
2ml |
-20℃ |
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溶菌酶 |
0.5g |
2g |
2-8℃ |
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裂解液 |
12ml |
50ml |
RT |
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TE缓冲液 |
10ml |
30ml |
RT |
原理简介
独特的裂解缓冲液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物质，将DNA提取出来，得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游应用实验。
注意事项
1．裂解液低温时可能出现析出和沉淀，可以在热水中温浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2．避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3. RNaseA经常使用可放2－8度保存，蛋白酶K请放－20度保存。
操作步骤
1．取100－300ul培养的细菌（如果细菌浓度很高，请减少细胞用量），12,000rpm，离心2分钟，尽可能的吸净上清。如果细菌为革兰氏阳性菌，请用溶菌酶处理，处理方法：称取100mg溶菌酶，加入1ml 双蒸水，溶解后，分装成100ul/支，冻存，用时取出一支，直接加入第一步收集的菌液中，重悬菌液，37度处理半小时，离心，去上清。如果为阴性菌，可跳过此步。
2． 加入200ul裂解液，立即震荡混匀，可选做步骤：如需要去除RNA，可以加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。
3．加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液，颠倒混匀，65℃放置10－30分钟，期间颠倒3－5次，小心内心管盖受热开启。
4．在上清中加入三倍体积无水乙醇，充分混匀。
5．12000rpm离心5min，弃上清，沉淀加入1ml 70%乙醇，轻轻混匀，再次12000rpm离心5min，弃上清，将离心管在离心机中再次离心30S左右，吸去底部少量液体。
7．室温放置2min左右，等沉淀边缘微微发白，加入50－100ulTE缓冲液溶解，如很难溶解，可55℃水浴5分钟。
8．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。 |
