DNA病毒基因组提取试剂盒
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试剂盒组成 |
50T |
200T |
保存温度 |
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蛋白酶K（10mg/ml） |
1ml |
4ml |
-20℃ |
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结合液 |
25ml |
100ml |
RT |
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玻璃奶 |
1ml |
2ml |
RT |
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TE缓冲液 |
10ml |
30ml |
RT |
原理简介
本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组，不适合于RNA病毒基因组的提取。本试剂盒利用蛋白酶K破开病毒外壳，放出DNA，用玻璃奶吸附达到纯化目的。
使用本试剂盒提取的DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
注意事项
1．如果病毒含量过低，最后提取的基因组DAN电泳可能无法检测到，但PCR等其他实验还会有结果。
2．同一样本，如果想大量提取，可以增加样本量，并且每一步试剂加量，但使用次数会成倍减少。
操作步骤
1、 取病毒上清液0.5ml，12000rpm离心5min，尽量取上清使用，弃去沉淀。
2、 向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，65℃消化10-20min，期间可颠倒离心管混匀数次。
3、 向管中加入500ul结合液，充分混匀。
4．玻璃奶摇匀。加入20ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。
5．室温放置10分钟（如果玻璃奶加量，请适当延长放置时间，此步为去除残余酒精，以免影响下游实验），加入30－50ul TE缓冲液混匀溶解，65℃水浴5分钟。离心，取上清为所得DNA。
8．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。 |
