总RNA提取试剂

原理简介
本试剂以本公司所产总RNA提取试剂（TRIzol）为基础，结合玻璃奶核酸吸附技术，使最终提取的RNA试剂纯度更高。

注意事项
1． 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2． 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3． 所有离心步骤最好用低温离心机在4℃条件下离心，如果实验室没有低温离心机，也可以使用常温离心机，但所提得的RNA可能会降解严重些。

操作步骤
准备工作：使用前请先开启一瓶新的无水乙醇，倒入漂洗液中，倒满至离瓶口约0.5-1ml，盖上瓶口，摇匀。
1．样品处理：
a，植物组织：以叶片RNA提取为例。取新鲜叶片在液氮中充分研磨，随后把研磨后的粉末迅速加入到裂解液中。大约50-100mg叶片使用1ml 裂解液。
b，动物组织：以鼠肝脏RNA提取为例。取新鲜或-70℃冻存组织，大约10-30mg组织加1ml裂解液，用一次性组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
a，单层培养细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每10cm2面积加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
c，细胞悬液：离心收集细胞。每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液。
d，血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置2分钟，8,000-10,000rpm 离心1分钟。彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。每200 ul血液收集的白细胞沉淀加入1 ml裂解液。
2．混匀，将匀浆样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3．向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟，使其自然分相。如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2分钟代替。
4．2-8℃ 12,000 rpm离心10分钟。样品会分成两层，RNA主要在上层的水相中，把水相（通常为500μl）转移到新DEPC处理管中。如果上清还有沉淀，可再次离心。
5．玻璃奶摇匀。加入50ul摇匀的玻璃奶，混匀，室温放置2分钟，10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入800ul漂洗液，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，再用600ul漂洗液洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清。
7．室温放置10分钟，加入50－100ul洗脱缓冲液混匀溶解，静置5分钟。离心，取上清为所提RNA。
8．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。