琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒
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试剂盒组成 |
100T |
400T |
保存温度 |
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溶胶液 |
50ml |
100ml×2 |
RT |
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玻璃奶 |
2.5ml |
10ml |
RT |
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TE缓冲液 |
10ml |
30ml |
RT |
原理简介
本试剂盒利用独特的缓冲液，可从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。
对于切下后不超过150mg的凝胶块，本试剂盒（以100T为例）可用100T。对于更小的凝胶块，本试剂盒使用次数更多。
注意事项
1、电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2、如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3、切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
4、回收<200bp DNA片段时，应加大溶胶液的体积（如5倍体积或者更高）。
5、回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。
6、如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤
1．将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取凝胶重量(可以用同一包装中的离心管去皮称量，各离心管间的误差可忽略)。
2．向胶块中加入3倍体积溶胶液（如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100µl，则加入300µl溶胶液，如为小片段，可加入5倍体积或者更高体积），50-55℃水浴放置5-10分钟，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
3．玻璃奶混匀。取25ul混匀的玻璃奶加入上面溶解的溶胶液中。混匀。
4．室温放置2-3分钟。期间可翻转混匀1-2次。
5．10000转/分钟离心1分钟，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振荡混匀，10000转/分钟离心1分钟，去上清，70%乙醇重复洗一次，再用无水乙醇洗一次。去上清，再次离心2分钟，用小吸头吸去上清（70%乙醇洗两次，无水乙醇洗一次）。
6．室温放置10分钟，加入30－50ul TE缓冲液混匀溶解，50-55℃水浴5分钟。离心，取上清转移到一新的离心管中。此为所提质粒。
7．电泳或者其他方法检测，进入下游实验。 |
