说明:50-100 mesh (dry),binding capacity 0.4meq/ml,Matrix 1% cross-linked polystyrene。主要用于去除酶等溶液中的二价阳离子,还可用于降低陪养基中钙镁离子的浓度。 外观:白色溶胀颗粒。 储存条件:室温
Chelex-100是一种化学螯合树脂,由苯乙烯、二乙烯共聚体组成。含有成对的亚氨基二乙酸盐离子,对高价金属离子有很高的亲合力和螯合作用。在低离子强度、碱性及煮沸条件下,可以使细胞膜破裂,并使蛋白质变性,DNA游离。Chelex-100特别适用于微量生物样本的处理,方法简便快速,提取过程始终在同一管中进行,不用转移,可减少DNA的损失,操作步骤简化,减少了污染的机会。
以血液DNA提取为例实验步骤: 1、取血液1-3ul,置1.5ml离心管中,加灭菌双蒸水1ml,振荡混匀,室温30min,或置冰箱-20℃5min。 2、10000r/min离心5min,弃上清,反复2-3次。 3、于沉淀中加入200ul悬浮好的5%的Chelex-100溶液,56℃水浴2h或37℃水浴过夜。 4、振荡5-10秒,置100℃5-10min,取出振荡溶液5-10s。 5、10000r/min5min,上清液即可作为PCR反应的DNA模板。
注意事项: 1、Chelex-100处理模板仅适用于PCR反应,处理液不宜长期保存,如果保存的时间稍长,可将上清液转移至另一管中保存备用。一般在一周内使用,如果保存时间过长则会影响PCR扩增结果。 2、在处理模板的各个步骤中,振荡要充分。 3、煮沸的温度、时间要充分,否则将影响扩增。 4、使用前要混匀离心,取上清液作为模板,如果PCR反应体系中含有Chelex-100,Mg2+会被螯合,降低酶活性,使PCR扩增失败。 |