说明:核和染色质的染色剂。 别名:苏木精;Haematoxylin;Hydroxybrazilin;Hydroxybrasilin 分子式:C16H14O6·3H2O 分子量:356.33 CAS#:517-28-2 外观:浅褐色粉末 特性:Em (550nm, 0.1M NaOH):>14700 熔点:200℃ 溶解性:溶于乙醇,参考浓度1mg/ml。 R:36/37/38 S:36/37/39 储存条件: 室温避光
一、苏木素的种类及其配制法
苏木素是一种天然染料,它的获得是从苏木素的树心提炼而成的,市售略带浅褐色结晶,易溶于酒精和甘油,较难溶于水,需加热才能溶解。苏木素产生于墨西哥的坎佩切,国内使用的几乎都为进口。
苏木素作为单一的染色是不行的,它染色力弱,必须具备两个条件才能具有强的染色力。一是产生有效成分苏木红,二是加入媒染剂。苏木红的产生需经氧化才能获得,获得苏木红有两种方法,一是天然成熟,苏木素与其它试剂混合好后,暴露于阳光或亮处,在自然光的作用下,慢慢地氧化成熟,但时间较长,一般需四周左右。二是加入化学试剂促进成熟,如加入黄色氧化汞或碘酸钠促使苏木素成熟。快速成熟的苏木素溶液有的可马上使用如Mayer氏苏木素,有的则需隔天使用。
苏木素种类较多,用法各异,有的用于常规染色,有的则用于特殊染色。
(1)明矾苏木素
1.Harris氏苏木素(1990)
苏木素 2.5g
无水酒精 25ml
硫酸铝钾(钾明矾) 50g
或硫酸铝铵(铵明矾)
蒸馏水 500ml
黄色氧化汞 1.25g
冰醋酸 20ml
该溶液为当前最广泛使用的染液,由于它染色时间短,效果好,很受使用者的欢迎。
配制时,先将苏木素溶于酒精(平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好,贮存备用),取一2000ml的三角烧瓶,倾入钾明矾,加入蒸馏水,于电炉上加热,熔解钾明矾,完全熔解后,待温度至90℃左右时,加入预先溶解好的酒精苏木素,继续加热至沸腾,延续3-5min,此时溶液逐渐加深,变为紫红色,拔离电源,加入黄色氧化汞,当充分氧化后,重新插上电源继续加热3-5min,此时溶液变深紫色,拔去电源,直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水里,放于暗处,第二天过滤后加入冰醋酸,即可使用三个月,但据我们的实践及多年的经验认为,只要掌握好切片的“无水化”,该染液可反复使用达一年之久(天天使用)。
注意事项:
①苏木素一定要预先溶解,否则较难彻底溶解。
②加入黄色氧化汞后,可产生大量的气泡,因此,配制500ml的溶液,一定要选择2000ml以上的容器,否则液体便会溢出。
③当溶液变为深紫色后,应终止氧化,烧瓶应直接插入冰水中,不要担心玻璃瓶会爆裂,因三角烧瓶经特殊处理的,不会有爆裂的危险,如果有,那是属于产品质量问题。迅速冷却的主要目的是不让溶液过度氧化,以免缩短溶液的使用寿命。
④溶液过滤后方加入冰醋酸,不要颠倒过来。如果加入冰醋酸后再过滤,过滤速度将非常慢,这是因为醋酸会使滤纸中的纤维膨胀,增加了密度,使溶液不易通过,导致过滤时间延长。
⑤该苏木素在使用一段时间后,可以在表面产生金属膜。当出现这种现象时,可用粗滤纸捞去,否则贴于切片上将较难除去。
⑥苏木素加入冰醋酸后,其PH值在2-2.28之间。
2.Mayer苏木素(1903)
苏木素 0.1g
蒸馏水 100ml
硫酸铝钾 5g
柠檬酸 0.1g
水合氯醛 5g
碘酸钠 20mg
该试剂有的单位用作常规切片的染色,用它染核不会过染,时间可在20min至30min,核染色质清晰可见,核呈灰黑色,可用作特殊染色核的对比染色试剂。如果先用天青石蓝为媒染剂,染色时间可在2-3分钟完成。
配制溶液时,先将蒸馏水稍加温,加入苏木素并不停搅拌直至完全溶解,继而加入硫酸铝钾,令其充分溶解后,加入柠檬酸和水合氯醛,继续搅拌均匀,全部溶解后再加入碘酸钠,搅拌均匀,此时溶液的颜色变为深棕色,过滤后即可使用。
3.Ehrlich氏苏木素(1886)
苏木素 1g
无水酒精 50ml
甘油 50ml
硫酸铝钾 7.5g
蒸馏水 50ml
冰醋酸 5ml
将苏木素溶于无水酒精里,硫酸铝钾溶于蒸馏水中,然后所有的试剂都加在一起,充分搅拌均匀后,放于窗台上阳光充足的地,让其慢慢氧化成熟,大约需四个星期,才可使用。该液 量种很好的细胞核染色液,用它染后,细胞核染色清晰,不易过染。对于用酸脱钙组织细胞核的染色,该试剂优于其它各种苏木素。这种自然氧化成熟的苏木素,可长期使用,不会变质。但染色时间较长,需要20分钟以上。
如需急用而苏木素又未成熟时,该液可加入20-30mg的碘酸钠,以促使其迅速氧化成熟,但这试剂配成后,就不是原来的苏木素,不能长期使用,但起码可用半年左右。
4.Carazzi氏苏木素(1911)
苏木素 0.5g
甘油 100ml
硫酸铝钾 25g
蒸馏水 400ml
碘化钾 0.1g
将苏木素溶于甘油,硫酸铝钾溶于300ml的蒸馏水中搅拌至完全溶解后,混合两液,将碘化钾溶于剩余的100ml蒸馏水中,加温到溶解后,混合于上述的混合液中,搅拌均匀,过滤后即可使用,染色时间10min左右,配成后的液体可保存半年左右。
5.Cole氏苏木素(1943)
苏木素 1.5g
饱合硫酸铝钾水溶液 700ml
碘酒(1克碘溶于95%酒精99ml中) 50ml
蒸馏水 250ml
将苏木素溶于加温的蒸馏水中,然后加入碘酒溶液,继而加入饱和硫酸铝钾溶液,混和均匀后加热,直至沸腾,将瓶子插入预备的冰水中,如同配制Hari氏苏木素一样,第二天过滤,即可使用,染色时间为20min以上。
(2)铁苏木素
1.Weigert氏铁苏木素
A液: 苏木素 1g
无水酒精 100ml
将苏木素溶于酒精,让其慢慢氧化成熟,约四周以后,便可以使用,或者用成熟的10%的苏木素酒精配制,即时可用。
B液: 29%三氯化铁水溶液 4ml
蒸馏水 95ml
盐酸 1ml
临用时,取A液和B液等份混合,即可使用,在4小时内使用完毕,如果超时,这种试剂便过分氧化而失效。因此,每次使用,需要多少配制多少,采取一次性用完,以免造成浪费。该染液具有抗弱酸的能力,因此,常用于某些特殊染色核的染色,染色时间为20-30分钟。
2.Heidenhain氏铁苏木素(1896)
A液: 苏木素 0.5g
无水酒精 10ml
蒸馏水 90ml
将苏木素溶于无水酒精,然后再加入蒸馏水,放置四周后便可成熟。
B液: 硫酸铁铵 5g
蒸馏水 100ml
这种铁苏木素可以显示多种物质如:横纹肌、髓鞘、线粒体、细胞核等,可被染为深灰色至黑色。
(3)钨苏木素
磷钨酸苏木素(PTAH)
苏木素 0.5g
磷钨酸 5g
蒸馏水 500ml
取300ml蒸馏水来溶解苏木素,其余的蒸馏水溶解磷钨酸,然后两者混合在一起,搅拌均匀后放于亮处,约四周左右才可成熟使用。
该试剂可以显示多种物质,如:横纹肌、神经胶质细胞、纤维、纤维素、髓鞘、胶厚,和细胞浆等,染色时间24小时以上。
这种试剂配成后,可连续使用达数年时间。
(4)钼苏木素
磷钼酸苏木素(Thomas, 1941)
A液: 苏木素 2.5g
二噁烷 49ml
过氧化氢 1ml
B液: 磷钼酸 16.5g
蒸馏水 44ml
二甘醇 11ml
将B液过滤,取滤液50ml加到A液中去,充分混合后,可见该试剂为深紫色,放置24小时后,才可使用。染色时间2分钟。它可显示的物质为:胶原及粗的网状纤维;亲银细胞;核、Daneth氏细胞等。
(5)铅苏木素(Solcia等,1969)
硝酸铅苏木素
A液: 1.5克苏木素溶于10ml 95%酒精中,取 1.5ml
硝酸铅贮存液 10ml
蒸馏水 10ml
混合上述液体,搅拌均匀后,静置30分钟后过滤。
B液: 5%硝酸铅水溶液 50ml
饱和醋酸铵水溶液 50ml
混合两液,过滤,再加入甲醛2ml。
将A和B液混合,反复搅拌后放置30分钟,过滤后可使用。染色时间37℃ 2-3小时,45℃ 1-2小时。
该试剂可将内分泌颗粒和APUD细胞颗粒显示出来,同时也可把肌肉和神经等显示出来。 |